GeneTex 是由科學家為科學研究而創立，我們了解研究人員期望并要求產品保真度，考慮到這一點，我們將越來越多的敲除/敲弱 (KO/KD) 驗證測試納入我們的質量保證 (QA) 標準，KO/KD 測試是我們提升“五大支柱驗證”計劃的主要方式，目的是向我們的客戶證明他們購買的 GeneTex 試劑值得他們信賴。

在特異性和性能可變性方面，人們越來越不信任市售抗體，因此，科研界要求抗體供應商加大力度，更徹底地驗證他們的產品，解決此問題的一種方法是通過敲除或敲弱靶蛋白。

GeneTex通過利用 CRISPR/Cas9 和 shRNA 生成的細胞裂解物進行蛋白質印跡分析，繼續為科研界提供最高質量和最嚴格驗證的抗體，迄今為止，我們已經評估了我們的大部分特色產品，并將繼續在我們的整個抗體目錄中擴大這些努力。

2016 年 Nature 子刊建議的 5 種抗體驗證方式，即是挑選抗體的金標準。

五大驗證包含基因敲除敲弱驗證、比較抗體驗證、免疫捕獲與質譜分析、生物特性與正交策略、蛋白過表達策略等驗證方式，說明如下：

一 基因敲除敲弱驗證

利用CRISPR/Cas9或RNAi等技術，將目標基因敲除或敲弱以驗證抗體對蛋白質表現量變化的信號反饋。

敲除（Knockout）使用 CRISPR/Cas9 將目標基因從整個基因組里去除，使目標蛋白不表達，收取此 Knockout 細胞裂解液作為對照組，可確認抗體專一性。

敲弱（Knockdown）使用 siRNA 將目標基因靜默，基因還在，但蛋白表達量降低甚至不表達。收取此 Knockdown 細胞裂解液作為對照組，可確認抗體專一性。

基因敲除敲弱驗證就是取有表達蛋白的細胞裂解液，跟使用基因技術去除或減少蛋白的裂解液做比較，如果抗體專一性辨識蛋白，應該會出現一個樣本有強條帶，另一個樣本弱（無）條帶，如抗體無專一性則條帶無變化。

范例: Vimentin antibody [HL1506] (GTX636980)

二 比較抗體驗證

使用兩種可識別目標蛋白表面不同抗原表位的獨立抗體，并通過對比或定量分析確定特異性。相同靶標、相同處理的樣品，理論上抗體辨識的條帶位置應該相同。如不相同，可能有其一抗體辨識錯誤蛋白或是其他原因；另外也可以通過比較找到更高敏的抗體。

范例: ERK1 (phospho Thr202/Tyr204) + ERK2 (phospho Thr185/Tyr187) antibody [HL173] (GTX635617)

三 免疫捕獲及質譜分析

利用IP/MS分析可直接定序與抗體直接發生相互作用的目標蛋白以及其所形成的蛋白質復合物，將免疫捕獲的目標蛋白進行質譜分析，可確認捕獲的蛋白身份是否為目標蛋白，以此確認抗體是否辨識到對的蛋白。

范例: PARP antibody [N2C1], Internal (GTX112864)

GTX112864 PARP 抗體通過免疫捕獲及質譜分析驗證（PMID：30377371），可進行 WB、ICC/IF、IHC-P、IP、ChIP assay 等多種應用，GeneTex的“PARP antibody [N2C1], Internal”通過了五項“抗體驗證支柱”的所有測試，證實其具高質量，高性價，與高特異性的產品優勢。此外，它已在多篇文獻中被引用，在不同物種上均能進行DNA修復，基因組穩定性和細胞凋亡方面的研究。

四 生物特性與正交策略

生物特性與正交策略是指利用目標蛋白質本身的生物特性作為基礎進行定性與定量驗證，或使用非抗體依賴方法(例如RNA表達量)，檢測基于抗體與生物特性或非抗體定量間的相關性，來驗證抗體的專一性，包含：

1. 使用加藥測試；

2. 以特殊條件處理細胞；

3. 使用已知具有蛋白高低表達量的樣本作為陽性與陰性對照組；

4. 細胞定位；

5. 組織專一性。

6. 范例: PD-L1 antibody [HL1041] (GTX635975)

五 目標蛋白過表達

利用在細胞中過表達目標蛋白，并收取細胞裂解液后進行 WB 分析，理論上蛋白量增多，抗體辨識后的信號也會增強，因此可確認抗體是否特異性辨認正確蛋白，過表達目標蛋白可作為抗體驗證的正控制組。

范例: PAX3 antibody [HL160] (GTX635463)

問題：

Q：五項驗證要同時通過嗎?

A：五項驗證要同時通過是非常困難的，主要受限于技術與材料，大部分的抗體驗證僅能通過 1~2 項的驗證，能同時通過 5 項驗證可說是少之又少，GeneTex的GTX109669 Calnexin抗體就是少數的例子之一，該抗體通過 5 項驗證方法，并且全面驗證 WB、ICC/IF、IHC-P、IP，是目前唯一一個能同時通過 5 種驗證的Calnexin抗體。

注：【免疫捕獲及質譜分析】驗證數據請參考 Nat Methods 期刊（PMID：30377371）

GeneTex還有 GTX628887 EGFR 抗體和GTX629744 Vimentin抗體、GTX107678 NFkB p65抗體、GTX112864、GTX112839 PARP 抗體都是少數同時通過五種驗證的例子。

挑選通過基因敲除敲弱、比較抗體、免疫捕獲及質譜分析、生物特性與正交策略和蛋白過表達五大支柱驗證的抗體，有助于實驗不走彎路，降低失敗率，更快完成實驗。

更多詳細信息，請咨詢GeneTex獨家代理商-欣博盛生物

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